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葡聚糖凝膠LH-20,天然產物精細純化的得力助手

更新時間:2020-08-12 點擊次數(shù):2493

圖|蛋白純化填料

 

天然產物是指從動物、植物及微生物中分離出來的生物二次代謝產物,自從發(fā)現(xiàn)來自天然界的有機化合物具有特殊的生理活性后,已經開發(fā)出許多具有治療和保健作用的藥物。

由于天然產物往往含有結構、性質不同的多種成分,且有效成分的含量一般較低。為了研究和開發(fā)天然產物,就要選擇合適的層析填料,從復雜的中草藥組成成分中提取、分離出有活性的單體純成分。

 

產品介紹

葡聚糖凝膠LH-20通過葡聚糖凝膠 G-25的羥丙基化制備,并且專門適合用于有機溶劑分離嗜脂性分子,天然產物在有機溶劑中的純化,例如類固醇,萜類化合物,脂質和低分子量肽。

 

 產品參數(shù)

 

 

葡聚糖凝膠 LH-20 的使用方法

 

將干粉浸泡于 60-70%乙醇中(充分攪拌),洗去可能存在的殘留物,抽干然后濕態(tài)不間隙裝柱,不能出現(xiàn)凝膠斷層(否則要重新裝柱),動態(tài)用一倍柱體積的 60-70%乙醇淋洗,再用水洗凈乙醇即根據自己選用洗脫液平衡層析柱至少兩個柱體積直到基線變得平穩(wěn)為止,如改變溶劑應該注意凝膠在新溶劑中的溶脹性質,并根據性質確定柱高。如使用相同的溶劑,在以后的層析中柱平衡可以省略。

 

葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑

 

葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑分為兩類:反相和正相兩種。用得多的是反相溶劑洗脫,以甲醇——水系統(tǒng)z為常見,先用水,逐漸增加甲醇比例,后用 100%甲醇沖柱。正相系統(tǒng)以lv仿——甲醇z為常見,先用 50%lv仿——甲醇,逐漸增加甲醇比例,后用 100%甲醇沖柱。

 

樣品的處理和洗脫溶劑的選擇

 

如果樣品極性大,選用反相溶劑洗脫(甲醇——水),樣品用少體積的甲醇——水(盡可能甲醇少一些)溶解,過濾后,濕法上樣(必須要進行過濾!否則把葡聚糖凝膠 LH-20 堵塞,就必須將葡聚糖凝膠 LH-20 的柱頭部分棄去, 造成不必要的浪費) 。如果樣品極性小, 這選用正相溶劑洗脫 (lv仿——甲醇) ,樣品用少體積的lv仿——甲醇溶解,過濾后,濕法上樣。

 

葡聚糖凝膠LH-20的分離技巧

 

(1)流速要控制好,流速不可太快,為了快加壓,分子篩效果會降低:過慢會導致樣品在柱子擴散嚴重,達不到分離效果。

(2)柱子盡可能長,Tandex LH-20 柱長的增加將ji大地改善分離,所不要吝惜填料,寧可將填料全裝在一根大柱子中,不要將填料裝成幾根小柱。所謂集中優(yōu)勢兵力,打擊敵人。

(3)餾分一定要接的細,可1/10,或1/20 個保留體積接成一餾分。

(4) 洗脫體積一般為2-3個保留體積,對特殊保留強的化合物,可洗脫5個保留體積。

(5)如果黃酮類化合物粗提物中有鞣質,那么你就要小心了,Tandex LH-20對鞣質幾乎是死吸附的。如果不考慮填料,可用Tandex LH-20分鞣質。

(6)填料反復使用,每次用完,一般可用甲醇將柱子洗干凈,然后用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來。

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