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什么是固相萃取?現(xiàn)在就帶你研究

更新時(shí)間:2021-04-22 點(diǎn)擊次數(shù):2806

樣品前處理是一項(xiàng)極其耗時(shí)、繁瑣且容易引入分析測(cè)定誤差的過(guò)程。樣品前處理方法對(duì)樣品的分析起著至關(guān)重要的作用,某種程度上來(lái)說(shuō),前處理決定了分析測(cè)試的結(jié)果,本文為大家呈現(xiàn)了一種常見(jiàn)的樣品前處理方法-固相萃取,它的一些原理與操作。


01 固相萃取吸附劑與目標(biāo)化合物之間的作用機(jī)理

 

固相萃取主要是通過(guò)固相吸附劑上的官能團(tuán)與目標(biāo)化合物的官能團(tuán)之間的作用力來(lái)保留/吸附的,這種作用力可分為非極性作用力、極性作用力、離子作用力、共價(jià)作用力等。

非極性作用力:對(duì)于鍵合硅膠及聚合物吸附劑而言,非極性作用力產(chǎn)生于固相萃取材料官能團(tuán)上的碳?xì)滏I與目標(biāo)化合物的碳?xì)滏I之間,常常被用于從樣品基質(zhì)中吸附分離具有非極性結(jié)構(gòu)的目標(biāo)化合物。如Welchrom® C18、Welchrom® C8、Welchrom® Phenyl等。

極性作用力:極性作用力發(fā)生在許多固相萃取材料極性表面與樣品中目標(biāo)化合物的極性官能團(tuán)之間,常見(jiàn)的具有極性作用力的吸附劑在色譜中一般都稱(chēng)為正相色譜吸附劑。常見(jiàn)的極性固相萃取材料包括:硅膠、氧化鋁、弗洛里硅土及含有氰基、氨基、二醇基的鍵合硅膠。

離子作用力:離子作用力發(fā)生在帶相反電荷的目標(biāo)化合物與固相萃取吸附劑官能團(tuán)之間。如強(qiáng)陽(yáng)離子交換劑 Welchrom® SCX、強(qiáng)陰離子交換劑Welchrom® SAX、弱陽(yáng)離子交換劑Welchrom® WCX等。

共價(jià)作用力:共價(jià)作用力發(fā)生在共價(jià)填料與目標(biāo)化合物之間,共價(jià)鍵不易被打斷,但有的官能團(tuán)形成的共價(jià)鍵在改變?nèi)軇┉h(huán)境的條件下是可逆的,如苯硼酸基。


02 pH值對(duì)固相萃取的影響

 

pH值可以改變目標(biāo)物/吸附劑的離子化或質(zhì)子化程度。對(duì)于強(qiáng)陽(yáng)/陰離子交換柱來(lái)講,因?yàn)槲絼┍旧硎?離子化的狀態(tài),目標(biāo)物必須*離子化才可以保證其被吸附劑*吸附保留。而目標(biāo)物的離子化程度則與pH值有關(guān)。如對(duì)于弱堿性化合物來(lái)講,其pH值必須小于其pKa值兩個(gè)單位才可以保證目標(biāo)物*離子化,而對(duì)于弱酸性化合物,其pH值必須大于其pKa值兩個(gè)單位才能保證其*離子化。對(duì)于弱陰/陽(yáng)離子交換柱來(lái)講,必須要保證吸附劑*離子化才保證目標(biāo)物的*吸附,而溶液的pH值必須滿(mǎn)足一定的條件才能保證其*離子化。


03 固相萃取操作步驟

 

針對(duì)填料保留機(jī)理的不同(填料保留目標(biāo)化合物或保留雜質(zhì)),操作稍有不同。

目標(biāo)化合物保留模式

固相萃取操作一般有四步:

①活化----除去小柱內(nèi)的雜質(zhì)并創(chuàng)造一定的溶劑環(huán)境。

②上樣----將樣品用一定的溶劑溶解,轉(zhuǎn)移入柱并使組分保留在柱上。

③淋洗----Z大C度除去干擾物。

④洗脫----用小體積的溶劑將被測(cè)物質(zhì)洗脫下來(lái)并收集。(注意流速不要過(guò)快)

 

雜質(zhì)保留模式

固相萃取操作一般有三步:

①活化----除去柱子內(nèi)的雜質(zhì)并創(chuàng)造一定的溶劑環(huán)境。

②上樣----將樣品轉(zhuǎn)移入柱,此時(shí)大部分目標(biāo)化合物會(huì)隨樣品基液流出,雜質(zhì)被保留在柱上,故此步驟要開(kāi)始收集。

③洗脫----用小體積的溶劑將組分淋洗下來(lái)并收集,合并收集液。(注意流速不要過(guò)快)


04 固相萃取柱(SPE)使用特點(diǎn)

 

樣品溶液體系性質(zhì)要與固相萃取要求相適應(yīng)。例如:在C18吸附待測(cè)化合物的模式中,樣品溶液體系中有機(jī)溶劑的比例不能太高;在C18吸附樣品基質(zhì)的模式中,樣品溶液體系中有機(jī)溶劑的比例不能太低。

要注意填料承載能力,防止上樣超載導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。

過(guò)柱流速要合適,不能過(guò)快或過(guò)慢,特別是樣品溶液上柱和洗脫兩個(gè)環(huán)節(jié)的過(guò)柱速度要控制。一般過(guò)柱流速為1~3mL/min。

對(duì)于使用硅膠基質(zhì)的SPE小柱在樣品溶液上柱前不能干涸。如果干涸了應(yīng)該重新對(duì)小柱進(jìn)行活化。

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