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Ultimate® SEC色譜柱的使用說明書

更新時間:2016-06-29 點擊次數:9274

Ultimate® SEC色譜柱性能介紹
Ultimate® SEC色譜柱是硅膠基質的體積排阻色譜柱,其色譜填料為高純度、具有良好穩(wěn)定性的硅膠微球表面鍵合親水性高分子聚合物。月旭公司采用特殊的表面修飾技術,確保了該填料具有良好的穩(wěn)定性和批次之間的較好重現性。
Ultimate® SEC填料采用*的化學鍵合技術,在硅球表面鍵合了親水性聚合物以及親水性二醇基官能團。雙重鍵合機制使水溶性高分子聚合物、蛋白、生物酶、多肽等生物樣品的非特異性吸附極小,廣泛應用于水溶性聚合物及生物大分子的分離和測定。

Ultimate® SEC色譜柱性能介紹

Ultimate® SEC色譜柱使用步驟:
1.將Ultimate® SEC色譜柱連接在HPLC系統(tǒng)上;
2.設置流速在0.8-1.0mL/min,首先用純水相平衡至少40min,然后用所使用的有機溶劑平衡至少30mi;
3.使用完畢后,先用純水相沖洗色譜柱至少40min以上,然后用高比例的有機相沖洗至少30min。

 

Ultimate® SEC色譜柱使用注意事項
1.使用前,請把色譜柱用純水沖洗40-60個柱體積,以確保柱填料能夠充分被潤濕,防止色譜柱在使用過程中造成固定相塌陷;
2.色譜柱在用純水流動相分析時,需要充分地用純水流動相平衡色譜柱,待基線充分平穩(wěn)后進樣分析;
3.由于該類型色譜柱一般用的流動性是純水相的緩沖鹽,因而色譜柱在使用完以后需要用純水流動相充分沖洗色譜柱,以保證緩沖鹽被充分的清除,防止緩沖鹽對色譜柱固定相造成的傷害;
4.長時間不使用色譜柱時,請將該類型色譜柱保存在高比例的有機溶劑-水溶液中,一般有機溶劑的比例為90%。

Ultimate® SEC色譜柱樣品與流動相
為了避免色譜柱的堵塞,所有的流動相和樣品都必須用0.45μm或0.2μm的濾膜過濾后使用。Ultimate® SEC柱可以使用水或有機溶劑和水的混合物,如甲醇(或乙腈)的水溶液等作為流動相。流動相在使用前必須脫氣處理。

Ultimate® SEC色譜柱的保養(yǎng)
1.溶劑
新的Ultimate® SEC柱中的流動相是90%的乙腈水溶液。長期不用其色譜柱內硅膠填料可能會干涸。此時需要用10-20倍柱體積的超純水進行沖洗以確保色譜柱的重新活化。然后可根據所需的流動相平衡色譜柱。流速由0.2mL/min逐漸升高至所需的流速,直至基線穩(wěn)定為止。如果柱壓和基線波動較大,這可能是氣泡進入了色譜柱。這時可用較高流速沖洗色譜柱2-5min,例如對于7.8×300mm的色譜柱可采用流速2.0mL/min。
2.pH
為了獲得*的分離效果和延長柱的使用壽命,盡量使用pH在2-8.5范圍內的流動相。
3.壓力
Ultimate® SEC柱可在高至6000psi的壓力下使用,但正常的操作壓力應當低于2000psi。長時間在高壓下使用會損壞色譜柱和輸液泵。一般情況下,柱壓會隨著色譜柱使用時間的增加而逐漸升高。此時建議將色譜柱反接后用合適的溶劑進行清洗、重新活化。
4.溫度
為了獲得zui長的使用時間,*操作溫度為10-30℃。

 

Ultimate® SEC色譜柱的再生步驟
Ultimate® SEC色譜柱的再生方法根據相關的樣品純度有不同的變化,越是生物大分子,越需要經常地對柱子進行再生,因為它們往往因為具有較大的體積而堵塞色譜柱,如果使用過程中發(fā)生柱壓突然升高或者色譜峰的峰型會與柱子發(fā)生置換??梢酝ㄟ^注射核糖核酸酶來測試柱子的置換情況。如果核糖核酸酶的峰有拖尾,那么柱子需要做以下處理:
將色譜柱與檢測器斷開;把柱子流路方向反過來,以高比例有機相(甲醇或乙腈)以0.2mL/min的流速沖洗一整夜,用30-50倍柱體積的超純水將色譜柱沖洗干凈。再生之后按照正常方向使用。

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